MHC 四聚体助力细胞免疫基础研究：CTL 表位筛选

人们在对免疫过程的研究中发现并证实，特异性 T 细胞激活的前提条件是 T 细胞受体（TCR）和 MHC-肽复合物结合，因此细胞毒性T细胞（CTL）表位在其中起着至关重要的作用。CTL 表位(CTL epitope)一般长度为8-10个氨基酸，是蛋白抗原经抗原递呈细胞（Antigen process cell，APC）加工处理，随后与 MHC-Ⅰ类分子结合并最终递呈给TCR识别，引起有效免疫应答的短肽。

CTL表位的筛选和鉴定在特异性 T 细胞应答检测中应用越来越广泛，同时在免疫诊断、治疗及疫苗的开发等都有重要作用。CTL表位的筛选和鉴定一直是生物治疗的关注点。但传统的表位鉴定技术大多采用先合成大量的交叠肽，然后通过后续的淋巴细胞实验进行选取。这种实验方法费时费力、费用高并且鉴定效率低。MHC四聚体技术的出现，为研究者创造了更为快捷高效的手段。

MHC四聚体（MHC Tetramer）技术，是由美国斯坦福大学John D. Altman博士等人于1996年开发，用于抗原特异性T细胞的检测。其原理是借助生物素、链霉亲和素系统，将MHC和肽形成MHC-肽四聚体复合物，增强了MHC-抗原肽复合物与TCR之间的结合力，从而可通过流式细胞技术检测或分选特异性T细胞，大大提高了特异性T细胞的检测灵敏度。该复合物制备过程如下图所示：

鉴于CTL 表位在免疫系统中的重要性，MHC四聚体技术在抗原特异T细胞的表位分析上的应用被高度关注。T细胞表位筛选方案一般根据所要研究的抗原肽相关蛋白，设计并合成多个交叠肽，然后将其分别制备成MHC四聚体，并进行分组，形成多组MHC肽四聚体混合物。用这些四聚体染色外周血单个核细胞（PBMC），通过流式细胞仪检测获得阳性反应组，随后将阳性反应组中所有的MHC四聚体再逐个染色PBMC鉴定，由此获得相关抗原蛋白的T细胞表位。这一筛选方案具有快速、灵敏、高效的优势。

近年来，已有研究者成功地将MHC-肽四聚体技术应用于 T细胞表位的鉴定工作。

CTL表位筛选推荐阅读：

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[2] Altman J, Moss P, Goulder P, et al. Phenotypic analysis of antigen-specific Tlymphocytes[J].Science,1996;274(5284):94-96.

[3] Murali K, Altman J, Suresh M, et al. Counting antigen-specific CD8 T cells :a revaluation of bystander activetion during viral infection[J].Immunity,1998,8 (2):177-187.

[4] Novak E J, Liu A W, Gebe J A, et al. Tetramer-guided epitope mapping :rapid identification and characterization of immunodominant CD4+ T cell epitopes from complex antigens[ J].J Immunol,2001,166(11):6665-6670.

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